PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Schaefer R., Zanella J.R.C., Brentano L., Vincent A.L., Ritterbusch G.A., Silveira S., Caron L. & Mores N. 2011. Isolation and characterization of a pandemic H1N1 influenza virus in pigs in Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(9):761-767. Embrapa Swine and Poultry Research Center, BR153, Km110, Vila Tamanduá, Concórdia, SC 89700-000, Brazil. E-mail: rejane@cnpsa.embrapa.br Influenza A virus (IAV) infections are endemic in pork producing countries around the world. The emergence of the pandemic 2009 human H1N1 influenza A virus (pH1N1) raised questions about the occurrence of this virus in Brazilian swine population. During a 2009-2010 swine influenza virus research project at Embrapa Swine and Poultry (CNPSA), an outbreak of a highly transmissible H1N1 influenza A virus disease was detected in a pig herd in Santa Catarina State, Brazil. The virus caused a mild disease in growing pigs and sows without mortality. Three clinically affected piglets were euthanized. Gross lesions included mild to moderate consolidation of cranioventral areas of the lung. Microscopically, the lesions were characterized by necrotizing obliterative bronchiolitis and bronchointerstitial pneumonia. Immunohistochemistry using a monoclonal antibody against type A influenza virus nucleoprotein revealed positive staining in the nuclei of the bronchiolar epithelial cells. Lung tissue from three piglets and nasal swabs from five sows and four piglets were positive for influenza A by RT-PCR. Influenza virus was isolated from one lung, later confirmed by the hemagglutination test (HA titer 1:128) and RT-PCR. Sequence analyses of Hemmaglutinin (HA) and Matrix (M) genes revealed that the virus was consistent with the pandemic (A/H1N1) 2009 influenza virus strain that circulated in humans. This is the first report of an outbreak of pandemic A/H1N1 influenza virus in pigs in Brazil.

• Influenza virus pandemic influenza H1N1 virus vírus influenza vírus pandêmico H1N1

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Schaefer R., Zanella J.R.C., Brentano L., Vincent A.L., Ritterbusch G.A., Silveira S., Caron L. & Mores N. 2011. Isolation and characterization of a pandemic H1N1 influenza virus in pigs in Brazil. [Isolamento e caracterização do vírus da influenza pandêmico H1N1 em suínos no Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 31(9):761-767. Embrapa Swine and Poultry Research Center, BR153, Km110, Vila Tamanduá, Concórdia, SC 89700-000, Brazil. E-mail: rejane@cnpsa.embrapa.br A infecção causada pelo vírus Influenza A (IAV) é endêmica em suínos no mundo inteiro. O surgimento da pandemia de influenza humana pelo vírus A/H1N1 (pH1N1) em 2009 levantou dúvidas sobre a ocorrência deste vírus em suínos no Brasil. Durante o desenvolvimento de um projeto de pesquisa do vírus de influenza suína em 2009-2010, na Embrapa Suínos e Aves (CNPSA), foi detectado em um rebanho de suínos em Santa Catarina, Brasil, um surto de influenza altamente transmissível causado pelo subtipo viral H1N1. Este vírus causou uma doença leve em suínos em crescimento e em fêmeas adultas, sem mortalidade. Tres leitões clinicamente afetados foram eutanasiados. As lesões macroscópicas incluiam consolidação leve a moderada das áreas cranioventrais do pulmão. Microscopicamente, as lesões foram caracterizadas por bronquiolite necrosante obliterativa e pneumonia broncointersticial. A imunohistoquímica, utilizando um anticorpo monoclonal contra a nucleoproteína do vírus influenza A, revelou marcação positiva no núcleo das células epiteliais bronquiolares. O tecido pulmonar de três leitões e os suabes nasais de cinco fêmeas e quatro leitões foram positivos para influenza A pela RT-PCR. O vírus influenza foi isolado de um pulmão, mais tarde sendo confirmado pelo teste de hemaglutinação (título HA 1:128) e por RT-PCR. A análise das seqüências de nucleotídeos dos genes da hemaglutinina (HA) e proteína da matriz (M) revelou que o vírus isolado foi consistente com o vírus pandêmico A/H1N1/2009 que circulou em humanos no mesmo período. Este é o primeiro relato de um surto de influenza causado pelo vírus pandêmico A/H1N1 em suínos no Brasil.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Montassier M.F.S., Brentano L., Montassier H.J. & Richtzenhain L.J. 2008. Genetic grouping of avian infectious bronchitis virus isolated in Brazil, based on RT-PCR/RFLP analysis of the S1 gene. Pesquisa Veterinária Brasileira 28(3):190-194. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-000, Brazil. E-mail: leonardo@usp.br Twelve Brazilian isolates and one reference vaccine strain of avian infectious bronchitis virus (IBV) were propagated in embryonating chicken eggs. The entire S1 glycoprotein gene of these viruses was analysed by reverse-transcriptase-polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (RT-PCR-RFLP), using the restriction enzymes HaeIII, XcmI and BstyI. The RFLP patterns led to the classification of these isolates into five distinct genotypes: A, B, C, D and Massachusetts. Five of twelve isolates were grouped in Massachusetts genotype and the remaining seven viruses were classified into four distinct genotypes: A (2), B (2), C (2) or D (1). Such genotyping classification agreed with previous immunological analysis for most of these viruses, highlighting the occurrence of a relevant variability among the IBV strains that are circulating in Brazilian commercial poultry flocks.

• Avian infectious bronchitis virus spike glycoprotein genotyping and RFLP

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Montassier M.F.S., Brentano L., Montassier H.J. & Richtzenhain L.J. 2008. Genetic grouping of avian infectious bronchitis virus isolated in Brazil, based on RT-PCR/RFLP analysis of the S1 gene. Pesquisa Veterinária Brasileira 28(3):190-194. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-000, Brazil. E-mail: leonardo@usp.br Twelve Brazilian isolates and one reference vaccine strain of avian infectious bronchitis virus (IBV) were propagated in embryonating chicken eggs. The entire S1 glycoprotein gene of these viruses was analysed by reverse-transcriptase-polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (RT-PCR-RFLP), using the restriction enzymes HaeIII, XcmI and BstyI. The RFLP patterns led to the classification of these isolates into five distinct genotypes: A, B, C, D and Massachusetts. Five of twelve isolates were grouped in Massachusetts genotype and the remaining seven viruses were classified into four distinct genotypes: A (2), B (2), C (2) or D (1). Such genotyping classification agreed with previous immunological analysis for most of these viruses, highlighting the occurrence of a relevant variability among the IBV strains that are circulating in Brazilian commercial poultry flocks.

Abstract in English:

Blood samples were obtained at slaughter from sixty 43 to 56 day old broilers, from each of 60 healthy flocks located in a region of high density poultry production. The flocks tested corresponded to approximately 10% of the total number existing in the region and were located within a radius of 50 km. All broilers had been vaccinated against Marek's disease atone day of age. Sera were tested in the immunodiffusion test for antibodies to avian reovirus (ARV), infectious bursal disease vírus (IBDV), fowl poxvirus (FPV), herpes virus of turkeys (HVT), avian adenovirus of groups 1 (AAV-1) and 2 (AAV-2). The sarne sera were tested in the micro serum neutralization test in plates for antibodies to infectious bronchitis virus (IBV) and infectious laryngotracheitis virus (ILTV), and for hemagglutination inhibition antibodies to Newcastle disease virus (NDV). Antibodies to ARV, detected in 2172 (63.6%) of 3418 sera, and to AAV-1, in 2701 (78.2%) of 3456 sera, were found in all 60 flocks, while antibodies to IBDV, in 3086 (89.4%) of 3452 sera, were found in only 57 of the sarne flocks. These results indicated that the three viruses are ubiquitous in broilers. Antibodies to FPV in 14 (0.5%) of 2935 sera, and to NDV in 6 (0.2%) of 3320 sera, were demonstrated in five of 59 and in one of 60 flocks, respectively, indicating that these two viruses occur only rarely. Antibodies to HVT, in 315 (9.0%) of 3384 sera, were detected in 39 of 60 flocks tested, suggesting poor serological response to vaccination and low field exposure to MDV. Antibodies to IBV, in 61 (2.1 %) of 2925 sera, were found in 12 of 57 flocks tested. However, in only one flock was the percentage of reactors significant (41 %); in the 11 flocks the percentage of broilers with antibody ranged from 1.7 to 16.1 %. Finally, no antibodies were found in 3491 sera from 60 flocks tested for AAV-2, nor in 3035 sera from 59 flocks when tested for ILTV, indicating that these two viruses do not exist in the geographical area tested. The significance of these findings is discussed.

• Antibodies broilers reovirus Gumboro Fowl pox Marek's disease adenoviruses infectious bronchitis infectious laryngotracheitis Newcastle disease

Abstract in Portuguese:

Amostras de sangue foram obtidas ao abate de 60 frangos de corte, de 43 a 56 dias de idade, de cada uma de 60 granjas sem problemas sanitários aparentes localizadas em uma região de alta densidade de produção avícola. As granjas correspondiam a 10% do número total que existe na região e estavam localizadas em um raio de 50 km. Todos os frangos tinham sido vacinados contra a doença de Marek no primeiro dia de vida. Os soros foram avaliados no teste de imunodifusão para anticorpos para reovírus aviário (R V A), vírus da doença infecciosa da bursa (VDIB), vírus da bouba aviária (VBA), vírus herpes de perus (HVT), adenovírus aviário do grupo 1 (AVA-1) e do grupo 2 (A VA-2). Os mesmos soros foram examinados no microteste de soroneutralização em placas para anticorpos para o vírus da bronquite infecciosa (VBI) e o vírus da laringotraqueíte infecciosa (VLTI), bem como anticorpos inibidores da hemoaglutinação para o vírus da doença de Newcastle (VDN). Anticorpos para RVA, detectados em 2172 (63,6%) de 3418 soros, e para AVA-1, em 2701 (78,2%) de 3456 soros, foram demonstrados em todas as 60 granjas, enquanto que, anticorpos para o VDIB, em 3086 (89,4%) de 3452 soros, foram encontrados em somente 57 destas granjas. Estes resultados indicam que os três vírus são ubíquos em frangos de corte da região estudada. Anticorpos para o VBA em 14 (0,5%) de 2935 soros, para o VDN em seis (0,2%) de 3320 soros, foram encontrados em cinco de 59 e em uma de 60 granjas, respectivamente, indicando que esses dois vírus ocorrem apenas raramente. Anticorpos para HVT, em 315 (9,0%) de 3484 soros, foram detectados em 39 de 60 granjas testadas, sugerindo resposta sorológica pobre à vacinação e baixa exposição de campo ao vírus da doença de Marek. Anticorpos para o VBI, em 61 (2,1%) de 2925 soros, foram encontrados em 12 de 57 granjas testadas. Porém, em apenas uma granja a percentagem de reagentes era significativa (41 %); nas outras 11 granjas a percentagem de frangos com anticorpos variava de 1,7 a 16,1%. Finalmente, não foram detectados anticorpos em 3491 soros de 60 granjas testada para A VA-2, nem em 3035 soros de 59 granjas testadas para o VLTI, indicando que esses vírus não existem na área geográficas estudada. O significado de todos os achados é discutido.

• Anticorpos frangos de corte reovírus Gumboro bouba Marek adenovírus bronquite infecciosa laringotraqueíte infecciosa Newcastle

Abstract in English:

A comparison was made between the plate immunodiffusion (ID) test and the micro-serum neutralization (SN) test in the detection of antibodies for Aujeszky's disease virus (ADV) in pig sera, using a total of 813 sera derived from five infected herds. The plate ID test was as sensitive and specific as the micro SN test in detecting positive sera that possessed neutralizing activity only when tested undiluted. Sera with this titer generally reacted by bending the precipitation line formed between the antigen and the reference serum. Sera with SN titers equal to or greater than eight, usually gave two lines of precipitation. The plate ID test was equally efficient and specific in detecting antibodies resulting from a natural infection or from vaccination with an inactivated oil-emulsion vaccine, as well as maternally-derived antibodies in the sera of piglets from vaccinated sows. Of 813 sera assayed in the micro SN test, 295 (36.3%) contained ADV antibody, 382 (47%) were negative and 136 (16.7%) were toxic. The sarne sera assayed in the plate ID test showed 347 (42.7%) positive for precipitating antibodies and466 (57.3%) negative. The major limitation of the SN test was the excessive percentage of sera (16.7%) that were toxic for the indicator cells (chicken embryo fibroblasts), due mainly to bacterial contamination and/or hemolysis as a result bad handling and storage of samples before arriving to the laboratory. The disagreement between the number of positive sera detected by the two tests in favor of the plate ID test, was due to the fact that 52 sera that were positive by this test were toxic when assayed by SN. Under the experimental conditions, the plate ID test was both sensitive and specific for the detection of antibodies for ADV, and as well as being economic, simple and rapid to perform, there is the advantage that it can be used to test moderately contaminated and/or hemolysed sera that are toxic for the indicator cells in the SN test.

• Serum neutralization immunodiffusion diagnosis Aujeszky swine

Abstract in Portuguese:

A comparação do teste de imunodifusão (ID) em placa e o microteste de soroneutralização (SN), na detecção de anticorpos para o vírus da doença de Aujeszky (VDA) em soros suínos, foi realizada em 813 soros oriundos de cinco plantéis infectados com o VDA. O teste de ID em placa foi altamente sensível e especifico, detectando como positivos soros que, no micro-teste de soroneutralização, apenas reagiam quando eram testados sem diluir. Os soros com este título reagiam, geralmente, dobrando a linha de precipitação formada entre o antígeno e o soro de referência. Soros com títulos SN de oito ou superiores apresentavam freqüentemente duas linhas de precipitação. O teste de ID foi igualmente eficiente e específico na detecção de anticorpos da infecção natural, da vacinação com vacina inativada oleosa, bem como de anticorpos transferidos da porca para os leitões via colostro. De 813 soros submetidos ao teste de SN, 295 (36,3%) revelaram anticorpos, 382 (47%) eram negativos e 136 (16,7%) eram tóxicos. Os mesmos soros submetidos ao teste de ID, revelaram 347 (42,7%) positivos para anticorpos precipitantes enquanto que, 466 (57,3%) eram negativos. A maior limitação do teste de SN foi a excessiva percentagem de soros tóxicos (16,7%) para as células indicadoras (fibroblastos de embrião de galinha), principalmente, devido a contaminação bacteriana e/ou hemólise causada por deficiente dessoragem e estocagem antes de serem enviados ao laboratório. A discordância entre o número de soros detectados como positivos para anticorpos em favor do teste de ID, foi devido ao fato de que 52 soros positivos por este teste foram tóxicos no teste de SN. Nas atuais condições, o teste de ID foi sensível e específico na detecção de anticorpos para o VDA e tem a vantagem de ser econômico, simples e rápido de realizar, além de poder testar soros moderadamente contaminados e/ou hemolisados que são tóxicos para as culturas celulares utilizadas no teste de SN.

• Soroneutralização imunodifusão diagnóstico Aujeszky suínos

Abstract in English:

Five reproductive herds and an Artificial Insemination Center with swine that had precipitating and/or neutralizing antibody for Aujeszky's disease virus (ADV) were identified in the State of Santa Catarina. ADV was eradicated on the basis of repeated testing followed by identification and removal of swine with antibody to ADV. The rates of infection detected in these herds were, respectively, 17%, 1.5%, 21.1%, 2.1%, 5.2% and 0.4%. The identification of antibody positive swine was initially made utilizing the plate immunodiffusion (ID) test and later, using the micro serumneutralization test associated or not to the ID test. In three herds, ADV was eradicated after the removal of antibody-positive swine identified in the first testing, indicating lack of lateral spread of the ADV strains involved. In two herds, ADV was eradicated only after the removal of positive swine identified in the second testing, indicating little lateral spread of the viruses involved. In one herd, ADV was only eradicated after the removal of antibody-positive swine identified in the third testing. The intervals between consecutive testings, varied between four and 28 weeks. It is concluded that ADV can be eradicated from infected herds through repeated testing and the immediate removal of swine with antibody for ADV.

• Aujeszky's disease swine virus serological test eradication

Abstract in Portuguese:

No Estado de Santa Catarina, foram identificados cinco plantéis de reprodutores e uma Central de Inseminação Artificial que possuíam suínos com anticorpos precipitantes e/ou neutralizantes para o vírus da doença de Aujeszky (VDA). A erradicação baseou-se na testagem repetida, identificação e remoção de suínos com anticorpos para o VDA. As taxas de infecção detectadas nos seis plantéis foram, respectivamente de: 17; 1,5; 21,1; 2,1; 5,2 e 0,4%. A identificação dos suínos com anticorpos foi realizada, inicialmente, utilizando-se o teste de imunodifusão em placa e, posteriormente, através do teste de soroneutralização em microplacas, associado ou não ao teste de imunodifusão. Após a primeira testagem, foi possível erradicar o VDA em três destes plantéis, através da identificação e remoção dos suínos com anticorpos, indicando a não ocorrência da disseminação lateral dos VDA envolvidos. Em dois plantéis, o VDA foi erradicado somente após a remoção de suínos positivos, identificados na segunda testagem, indicando escassa disseminação lateral dos vírus envolvidos. Em um plantel, o VDA somente foi erradicado após a remoção dos suínos com anticorpos, identificados na terceira testagem. Os intervalos entre testagens consecutivas, variaram entre quatro e 28 semanas. Concluiu-se que o VDA pode ser erradicado de plantéis infectados através de testagem repetida e a imediata eliminação de suínos portadores de anticorpos para o VDA.

• Doença de Aujeszky suínos; vírus diagnóstico sorológico erradicação

Abstract in English:

A seroepidemiological suivey utilizitig the micro serum neutralization test for the detection of antibodies to transmissible gastroenteritis (TGE) virus was carried out on 5859 swine sera obtained from 59 of the 70 reproductive herds, registered with the Swine Breeding Association of Santa Catarina, distributed in 24 counties within the state. When tested undiluted and in the 1 :2 and 1 :4 dilutions, none of the 403 sera obtained from boars contained antibody, while of the 5451 sow sera tested, 5444 were devoid of antibody, five were toxic for the indicator cells and two had a neutralizing activity up to the 1 :2 dilution. Testing of a second sample obtained from these two pigs revealed that they were free of antibody. The results of this suivey indica te that the reproductive swine herds of the State of Santa Catarina tested in the present study are free of infection with TGE virus.

• Transmissible gastroenteritis antibodies reproductive swine herds Santa Catarina (State)

Abstract in Portuguese:

Foi realizado um inquérito soro-epidemiológico utilizando o microteste de soroneutralização para a detecção de anticorpos para o vírus da gastroenterite transmissível (TGE) em 5859 soros suínos obtidos de 59 dos 70 plantéis de reprodutores registrados na Associação Catarinense de Criadores de Suínos (ACCS), distribuídos em 24 municípios do Estado de Santa Catarina. Quando testados não diluídos e nas diluições de 1 :2 e 1 :4, nenhum dos 403 soros obtidos de cachaços continham anticorpos, enquanto que, dos 5451 soros de porcas testados, 5444 estavam isentos de anticorpos, cinco foram tóxicos para as células indicadoras e apenas dois possuíam uma atividade neutralizante até a diluição de 1 :2. A testagem de uma segunda amostra destes dois suínos revelou que eram livres de anticorpos. Os resultados do inquérito indicam que os plantéis de reprodutores suínos do Estado de Santa Catarina testados no presente estudo, encontram-se livres da infecção com o vírus da TGE.

• Gastroenterite transmissível anticorpos plantéis reprodutores suínos Santa Catarina (Estado)

Abstract in English:

A sero-epidemiological survey utilizing the plate immunodiffusion (ID) test for the detection of antibodies in the serum to Aujeszky's disease vírus (ADV) was performed in swine herds in the State of Santa Catarina. A total of 9303 sera were tested of which 6521 sera were obtained from 67 (89,3%) of 75 existing breeding herds in Santa Catarina distributed in 30 municipalities. Sixty four (1 %) of the latter sera belonging to six herds contained detectable antibodies, with clinical Aujeszky's disease (AD) being diagnosed in two of the herds. Similar ID tests performed on sera obtained from 377 young shoats from five of six Pedigree Testing Stations existing in Santa Catarina and distributed in five municipalities were all negative, while four infected boars were found of 19 tested in an Artificial Insemination (AI) Center. When the sarne testing procedure was applied to 2386 sera from 10 fattening herds located in four municipalities, antibodies were detected in 61 (2.6%) sera, all derived from three herds with history of AD mortality. It is concluded that ADV infection of breeding herds in the State of Santa Catarina is sporadic in nature, nonendemic, very restricted in distribuition and presently under contral, due to the surveillance program recently implemented. The finding of infected animals of european origin in an AI center shows us the weakness of our internatinal sanitary police and the dangers involved in the importation of foreign stock. More work is needed to determine the real prevalence and distribuition of ADV in fattening herds.

• Aujeszky's disease virus antibodies swine Santa Catarina

Abstract in Portuguese:

Foi realizado um inquérito soro-epidemiológico utilizando-se a prova de imunodifusão (ID) em placa para detectar anticorpos para o vírus da doença de Aujeszky (VDA) em rebanhos suínos no Estado de Santa Catarina. Foram testados 9303 soros, dos quais, 6521 foram obtidos de 67 (89,3%) plantéis de reprodutores dos 75 registrados na Associação Catarinense de Criadores de Suínos, distribuídos por 30 municípios, encontrando-se 64 (1 %) soros, pertencentes a seis plantéis, com anticorpos, verificando-se também a ocorrência da doença de Aujeszky (DA) em dois desses seis plantéis. Provas de ID similares realizadas em soros obtidos de 377 cachaços jovens, de cinco das seis Estações de Testes de Reprodutores Suínos existentes em Santa Catarina, distribuídas por cinco municípios, foram todas negativas, enquanto que foram detectados quatro (21 %) reprodutores infectados de 19 testados numa Central de Inseminação Artificial (IA). Quando a mesma prova foi aplicada a 2386 soros de 10 plantéis de terminação, distribuídos por quatro municípios, anticorpos foram detectados em 61 (2,6%) soros, todos obtidos de três plantéis com histórico de mortalidade devida à DA. Concluiu-se que a infecção de plantéis reprodutores com a VDA naquele Estado é esporádica, não endêmica, muito restrita em distribuição e atualmente sob controle, devido ao programa de vigilância recentemente implatado. O achado de reprodutores infectados de origem européia numa Central de IA demonstra a fraqueza de nosso policiamento sanitário internacional e os perigos de importações de material genético para fins de melhoramento. Mais pesquisa é necessária para determinar a real prevalência e distribuição do VDA em plantéis de terminação.

• Doença de Aujeszky vírus anticorpos suínos Santa Catarina